okta-nitip1RNA interference (RNAi) dapat dipengaruhi secara in vitro dengan aplikasi sintesis siRNAs atau dengan ekspresi intraselular siRNAs atau shRNAs dari vektor. Sebagian besar untuk ekspresi siRNA/shRNA menggunakan promotor yang didasarkan pada transkripsi polimerase III (pol III) dependen. Kita mengembangkan vektor alternatif untuk ekspresi siRNA/shRNA, menggunakan promotor polimerase I (Pol I) RNA tikus. Transkripsi Pol I dependen disajikan salam sel untuk produksi RNA ribosomal (rRNA), dan seperti yang lain, aktif ada dimana – mana dan stabil dalam jenis sel yang berbeda. Transkripsi Pol I dependen merupakan spesies khusus, karena Pol I berdasarkan sistem yang memberikan keuntungan keamanan secara biologis yang penting dengan melihat pada penghilangan gen dengan fungsi yang tidak diketahui.
Pada penelitian ini memperlihatkan vektor baru yang cocok untuk ekspresi shRNAs. Dicer memproses shRNAs menjadi siRNAs sebagai molekul yang mempengaruhi dalam penghilangan gen.
Aturan yang mengatur transkripsi Pol I dependen sudah diteliti secara luas, membuat desain dari beberapa kemungkinan transkripsi yang tepat. Penelitian ini menggunakan beberapa desain dan metode, yaitu: cloning, , kultur sel, pengujian in vitro kadar rekaman logam, transfections dan analisa Western blot.
Kloning merupakan tahap pertama dimana semua plasmid Pol I yang diuraikan telah diperoleh dari ribosomal minigen pW. Selanjutnya dilakukan kultur sel untuk pengujian yaitu: FM3A, HEK293, HT22, NH9, Neuro-2a dan sel HeLa. Lalu pengujian in vitro kadar logam dimana ekstrak nuklir telah disiapkan dari pertumbuhan sel FM3A, untuk menguji kadar logam Pol Rekaman I-specific. Untuk transfection peneliti membandingkan perbedaan pada manusia (HEK 293, HeLa) dan sel tikus (HT22, NH9, Neuro-2a). Tahapan terakhir analisis Western blot yaitu menguji rekaman ekspresi yang baru untuk melakukan penghilangan gen endogenous dengan cara melakukan kloning shRNA, menuju Erk2, dalam vektor pE3SP-MSC, dan mengujinya untuk aktivitas penghilangan dalan sel ES tikus IDG3.2 dan sel tikus HN9.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk membandingkan antara Pol III dan pol I.

Nama : Okta Rosmaliatini
NIM : O1A005062
Email : ochta_0110@yahoo.co.id
Website: http.//oktafarmasi.wordpress.com